ZNF831 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-414334-LAC-2

ZNF831 umano codifica una proteina a dita di zinco C2H2 contenente un dominio KRAB, che si prevede agisca come regolatore trascrizionale legante il DNA, coordinando programmi di espressione genica tramite interazioni specifiche di sequenza con promotori/enhancer e il reclutamento di complessi co-repressori che modificano la cromatina. Attraverso queste attività, ZNF831 è implicato nel controllo epigenetico delle decisioni di stato cellulare, nelle reti trascrizionali legate al sistema immunitario e in processi più ampi quali la differenziazione e la segnalazione infiammatoria. Studi genetici e di espressione hanno associato ZNF831 alla suscettibilità a malattie immuno-mediate e a una omeostasi immunitaria alterata, a supporto della sua rilevanza per indagini meccanicistiche dei circuiti regolatori associati all’autoimmunità. La perturbazione mirata di ZNF831 consente ai ricercatori di analizzare le interazioni tra fattori di trascrizione e cromatina, mappare le reti geniche a valle e validare varianti regolatorie in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ZNF831 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ZNF831 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ZNF831 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF831, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ZNF831. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ZNF831 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.