ZNF71 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410081-ACT

ZNF71 codifica una proteina zinc finger C2H2 contenente un dominio KRAB, implicata nella regolazione trascrizionale sequenza-specifica e nel controllo epigenetico dell’espressione genica. In quanto potenziale repressore trascrizionale, si prevede che ZNF71 interagisca con i complessi di rimodellamento della cromatina associati a KRAB/KAP1 (TRIM28), influenzando la formazione di eterocromatina e i programmi di silenziamento trascrizionale che modellano l’identità cellulare e gli stati trascrizionali responsivi allo stress. Un’alterata regolazione dei fattori di trascrizione zinc finger è frequentemente associata a differenziazione disregolata, instabilità genomica e reti trascrizionali oncogeniche, rendendo ZNF71 rilevante per lo studio dei circuiti di regolazione genica. Nei sistemi umani, l’analisi dell’espressione di ZNF71 e degli effetti trascrizionali a valle supporta studi meccanicistici sulla modulazione di vie dipendenti dalla cromatina e su firme trascrizionali associate a patologie.

ZNF71 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF71 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF71 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF71 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF71, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF71. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF71 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF71 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF71 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF71 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.