ZNF35 Plasmide Double Nickase (h): sc-411079-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZNF35 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZNF35 Double Nickase Plasmid (h) e il ZNF35 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZNF35. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZNF35 Antibody (C-11): sc-376972
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZNF35 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411079-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZNF35 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411079-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZNF35 codifica una proteina a dita di zinco C2H2 con dominio KRAB, implicata nel legame al DNA in modo specifico per sequenza e nella repressione trascrizionale tramite il reclutamento di complessi co-repressori come KAP1/TRIM28, promuovendo la formazione di eterocromatina e il silenziamento epigenetico. Nell’ambito di reti più ampie di regolazione genica mediate da dita di zinco, ZNF35 è in grado di influenzare l’organizzazione della cromatina, il controllo della trascrizione da parte della RNA polimerasi II e i programmi di mantenimento dello stato cellulare. Un’espressione alterata o variazioni regolatorie nei fattori KRAB-ZNF sono state associate a programmi trascrizionali deregolati osservati nel cancro e in altre malattie, rendendo ZNF35 un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali e il controllo epigenetico nelle cellule umane. L’analisi funzionale di ZNF35 può aiutare a chiarire come le proteine KRAB-ZNF contribuiscano alla repressione genica specifica di linea e alla stabilità dei pattern di espressione genica.
ZNF35 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZNF35 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZNF35. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZNF35. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZNF35 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.