ZNF143 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423169-ACT

Il gene murino Zfp143 codifica il fattore di trascrizione ZNF143, una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che contribuisce all’architettura dei promotori e a programmi trascrizionali di ampia portata. ZNF143 partecipa alla trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II, all’organizzazione della cromatina e alla regolazione di reti geniche legate al ciclo cellulare e alla replicazione, incluse quelle associate all’avvio della replicazione del DNA e alla stabilità del genoma. Per queste attività, le alterazioni dell’espressione di ZNF143 sono spesso studiate in relazione al controllo della proliferazione, alla disregolazione trascrizionale e al rimodellamento dell’espressione genica in risposta allo stress. Nei sistemi murini, Zfp143 rappresenta un nodo utile per analizzare i circuiti regolatori che influenzano i programmi di sviluppo e stati trascrizionali rilevanti per la malattia.

ZNF143 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Zfp143 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF143 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Zfp143 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Zfp143, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF143. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Zfp143 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF143 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF143 nelle cellule tumorali con espressione di Zfp143 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.