ZIP-kinase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409173

Panoramica

DAPK3 (ZIP-kinasi) è una chinasi serina/treonina regolata da Ca2+/calmodulina che coordina la dinamica actomiosinica e la segnalazione contrattile attraverso la fosforilazione della catena leggera regolatoria della miosina e di substrati citoscheletrici correlati. Partecipa a vie che controllano la formazione delle fibre di stress, il blebbing di membrana, la citocinesi e la morte cellulare programmata, collegando il rimodellamento del citoscheletro alle risposte cellulari allo stress. L’attività della ZIP-kinasi si interseca con la contrattilità regolata da ROCK/MLCK e può influenzare gli output trascrizionali tramite nodi di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione. Una segnalazione di DAPK3 deregolata è stata associata a fenotipi alterati di proliferazione, motilità e apoptosi rilevanti per la biologia del cancro, nonché a meccanismi di malattie vascolari e infiammatorie in cui il tono della muscolatura liscia e l’organizzazione del citoscheletro risultano perturbati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZIP-kinase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DAPK3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DAPK3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DAPK3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZIP-kinase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DAPK3 per lo studio della segnalazione di ZIP-kinase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DAPK3 critici per la funzione di ZIP-kinase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DAPK3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DAPK3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZIP-kinase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZIP-kinase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DAPK3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DAPK3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.