Zic3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407048-ACT

ZIC3 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco Zic3, una proteina nucleare che si lega al DNA e regola la strutturazione precoce dell’embrione e la specificazione dell’asse sinistra–destra. Zic3 modula reti di regolazione genica coinvolte nella formazione del mesendoderma, nello sviluppo neurale e nella segnalazione dipendente dalle ciglia, che si integra con vie come NODAL/SMAD e WNT durante la morfogenesi. Un’espressione o una funzione deregolata di ZIC3 è associata a difetti di lateralità e malformazioni congenite, rendendolo un nodo utile per lo studio dei programmi trascrizionali dello sviluppo. Nei modelli cellulari umani, ZIC3 offre un readout gestibile per indagare la specificazione di linea, il controllo dello stato della cromatina nei loci dello sviluppo e il rimodellamento delle reti guidato dai fattori di trascrizione.

Zic3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZIC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Zic3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZIC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZIC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Zic3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZIC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Zic3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Zic3 nelle cellule tumorali con espressione di ZIC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.