Zic2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404720

Panoramica

ZIC2 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco Zic2, un regolatore chiave della patterning embrionale e dello sviluppo neurale che modula programmi di espressione genica responsabili della specificazione del destino cellulare, della proliferazione e della differenziazione. Zic2 agisce all’interno di reti trascrizionali dello sviluppo e interseca vie di segnalazione che modellano la morfogenesi, incluse quelle che influenzano la formazione del tubo neurale e la patterning della linea mediana del prosencefalo. Un’alterata attività di ZIC2 è associata a disturbi neuroevolutivi congeniti, in particolare all’oloprosencefalia, e un’espressione deregolata è stata riportata in studi di biologia dei tumori e di plasticità di linea. In quanto regolatore trascrizionale che si lega al DNA, Zic2 offre un punto di accesso meccanicistico per indagare il controllo enhancer–promoter, la trascrizione dipendente dalla cromatina e i circuiti regolatori genici dello sviluppo nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Zic2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZIC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZIC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZIC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Zic2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZIC2 per lo studio della segnalazione di Zic2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZIC2 critici per la funzione di Zic2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZIC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Zic2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Zic2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZIC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Zic2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Zic2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZIC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZIC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.