ZDHHC20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406353-ACT

ZDHHC20 codifica una palmitoiltransferasi della famiglia DHHC che catalizza la S‑palmitoilazione di residui di cisteina citosolici su proteine associate alla membrana, modulandone traffico, stabilità e capacità di segnalazione. Regolando cicli dinamici di palmitoilazione, ZDHHC20 influenza l’organizzazione dei microdomini di membrana e le vie a valle collegate alla segnalazione recettoriale, al trasporto vescicolare e alle risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’omeostasi della palmitoilazione sono state associate a una regolazione aberrante della crescita e della segnalazione immunitaria, e ZDHHC20 è stata studiata nel contesto della biologia del cancro, della regolazione metabolica e delle interazioni ospite–patogeno. Queste caratteristiche rendono ZDHHC20 un nodo utile per analizzare i meccanismi di lipidazione post‑traduzionale e il rimodellamento delle vie di segnalazione nelle cellule umane.

ZDHHC20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZDHHC20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZDHHC20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZDHHC20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZDHHC20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZDHHC20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZDHHC20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZDHHC20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZDHHC20 nelle cellule tumorali con espressione di ZDHHC20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.