ZBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406434-ACT

ZBP1 (proteina 1 legante il DNA in forma Z; nota anche come DAI) è un sensore dell’immunità innata che riconosce gli acidi nucleici in conformazione Z e collega segnali associati a patogeni o a danno cellulare a risposte antivirali e infiammatorie. Una volta attivata, ZBP1 instaura interazioni dipendenti dal RHIM con RIPK3 e può avviare programmi di morte cellulare regolata, inclusa la necroptosi, intersecandosi al contempo con reti trascrizionali guidate dall’interferone. Questo asse di segnalazione si integra con le vie dei recettori di riconoscimento dei pattern e modula la produzione di citochine e le decisioni sul destino cellulare in risposta a infezione virale e stress cellulare. Un’attività di ZBP1 disregolata è stata collegata a segnalazione dell’interferone aberrante, patologie infiammatorie e interazioni virus–ospite rilevanti per l’immunologia e la ricerca sulla morte cellulare.

ZBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZBP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZBP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZBP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZBP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZBP1 nelle cellule tumorali con espressione di ZBP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.