Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZBP1: sc-406434-ACT

ZBP1 (protéine 1 se liant à l’ADN Z ; également connue sous le nom de DAI) est un capteur de l’immunité innée qui reconnaît les acides nucléiques en conformation Z et couple des signaux associés aux agents pathogènes ou aux dommages à des réponses antivirales et inflammatoires. Lors de son activation, ZBP1 établit des interactions dépendantes du RHIM avec RIPK3 et peut déclencher des programmes de mort cellulaire régulée, notamment la nécroptose, tout en s’articulant avec des réseaux transcriptionnels pilotés par l’interféron. Cet axe de signalisation s’intègre aux voies des récepteurs de reconnaissance des motifs et module la production de cytokines ainsi que les décisions de destin cellulaire en réponse à l’infection virale et au stress cellulaire. Une activité dérégulée de ZBP1 a été associée à une signalisation anormale de l’interféron, à des pathologies inflammatoires et à des interactions virus–hôte pertinentes pour la recherche en immunologie et en mort cellulaire.

ZBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.