ZAP Plasmide Double Nickase (m): sc-429710-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZAP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZAP Double Nickase Plasmid (m) e il ZAP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Zc3hav1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZAP Plasmide Double Nickase (m) | sc-429710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZAP Plasmide Double Nickase (m2) | sc-429710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Zc3hav1 codifica la proteina antivirale a dita di zinco (ZAP), un fattore legante l’RNA indotto dall’interferone che limita un’ampia gamma di virus a RNA riconoscendo trascritti virali arricchiti in CpG e promuovendone la degradazione. ZAP coordina la segnalazione antivirale dell’immunità innata attivando vie di decadimento dell’RNA e di controllo della traduzione e interfacciandosi con complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina come TRIM25, amplificando così l’attività di restrizione. Attraverso queste funzioni, ZAP contribuisce a plasmare le risposte cellulari all’infezione e all’infiammazione, influenzando i programmi trascrizionali guidati dall’interferone e il metabolismo dell’RNA associato allo stress. Alterazioni dell’attività di ZAP sono state collegate a differenze nella suscettibilità virale e possono modulare fenotipi immuno-correlati rilevanti per la biologia delle infezioni e le interazioni ospite–patogeno.
ZAP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Zc3hav1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Zc3hav1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Zc3hav1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Zc3hav1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.