Z39Ig Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404067-ACT

Il gene umano VSIG4 (Z39Ig) codifica un recettore immunoregolatore correlato alla famiglia B7, espresso prevalentemente nei macrofagi residenti nei tessuti, incluse le cellule di Kupffer, dove modula il dialogo tra immunità innata e adattativa. VSIG4 funziona come recettore del complemento per frammenti di C3 e partecipa alla clearance fagocitica e alla soppressione dell’attivazione delle cellule T, plasmando il tono infiammatorio nel microambiente tissutale. Attraverso queste attività, Z39Ig influenza l’opsonizzazione mediata dal complemento, i programmi di polarizzazione dei macrofagi e una segnalazione di tipo “immune checkpoint” che limita l’eccessiva produzione di citochine. L’espressione deregolata di VSIG4 e le vie associate ai macrofagi vengono spesso studiate in contesti quali infiammazione cronica, fibrosi, biologia delle infezioni e meccanismi di evasione immunitaria dei tumori.

Z39Ig Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VSIG4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Z39Ig Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VSIG4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VSIG4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Z39Ig. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VSIG4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Z39Ig nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Z39Ig nelle cellule tumorali con espressione di VSIG4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.