YME1L1 Plasmide Double Nickase (h): sc-409793-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- YME1L1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il YME1L1 Double Nickase Plasmid (h) e il YME1L1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira YME1L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
YME1L1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409793-NIC | 20 µg | $410.00 |
YME1L1 codifica una metalloproteasi mitocondriale AAA+ ATP-dipendente della membrana interna, che sostiene la proteostasi mitocondriale degradando proteine associate alla membrana ripiegate in modo errato o in eccesso e regolando il turnover di fattori chiave della catena respiratoria e del rimodellamento delle membrane. Attraverso il controllo di qualità della membrana interna e il rimodellamento dei complessi proteici, YME1L1 contribuisce all’efficienza della fosforilazione ossidativa, alla dinamica mitocondriale e a vie di segnalazione sensibili allo stress collegate all’omeostasi bioenergetica. L’alterazione della funzione di YME1L1 è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale, tra cui architettura delle creste modificata, respirazione compromessa e maggiore sensibilità allo stress proteotossico. Queste caratteristiche rendono YME1L1 un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi alla base del mantenimento mitocondriale e delle vie implicate nella neurodegenerazione e in altri disturbi legati ai mitocondri.
YME1L1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus YME1L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di YME1L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di YME1L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con YME1L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.