Y+LAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404403

Panoramica

SLC7A7 codifica Y+LAT1, una subunità a catena leggera del sistema eteromerico di trasporto degli amminoacidi y+L che si associa a SLC3A2 (4F2hc/CD98) per mediare lo scambio di amminoacidi cationici come lisina e arginina con amminoacidi neutri attraverso la membrana plasmatica. Questa attività di trasporto contribuisce al bilancio dell’azoto cellulare e collega la disponibilità di amminoacidi all’omeostasi metabolica e ai processi di sensing dei nutrienti. La funzione di Y+LAT1 è particolarmente rilevante in contesti epiteliali e immunitari, dove il flusso di amminoacidi influenza la crescita e gli output di segnalazione. L’alterazione patogena di SLC7A7 è associata all’intolleranza proteica lisinurica, collegando i difetti di trasporto dipendenti da Y+LAT1 a uno squilibrio sistemico degli amminoacidi e a complicanze infiammatorie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Y+LAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC7A7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC7A7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC7A7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Y+LAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC7A7 per lo studio della segnalazione di Y+LAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC7A7 critici per la funzione di Y+LAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC7A7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC7A7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Y+LAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Y+LAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC7A7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC7A7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.