XRN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401910-ACT

ヒトXRN1は、高度に保存された5′→3′エキソリボヌクレアーゼをコードしており、デキャップされた転写産物を分解し、RNAターンオーバーの過程で生じたRNA断片を除去することで、細胞質におけるmRNA分解を駆動する。XRN1はデキャッピング因子やプロセシングボディ（P-bodies）と協調してトランスクリプトームの恒常性を形成し、ナンセンス依存性mRNA分解（NMD）、miRNA介在性サイレンシング、異常RNAに対する自然免疫の感知といった経路に影響を与える。細胞周期制御、分化、ストレス応答に関わるmRNAの安定性を調節することで、XRN1はプロテオスタシスとシグナル伝達の忠実性の維持に寄与する。RNA分解の破綻やXRN1活性の変化は、がん生物学で見られる異常な遺伝子発現プログラム、神経発生の表現型、ウイルス—宿主相互作用と関連づけられており、転写後制御の機構研究における有用な結節点となっている。

XRN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XRN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

XRN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XRN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXRN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性XRN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXRN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるXRN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXRN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるXRN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。