Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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XPG Plasmide Double Nickase (h): sc-416940-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- XPG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il XPG Double Nickase Plasmid (h) e il XPG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERCC5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: XPG Antibody (8H7): sc-13563
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
XPG Plasmide Double Nickase (h) | sc-416940-NIC | 20 µg | $410.00 |
ERCC5 codifica l’endonucleasi XPG, una nucleasi specifica per la struttura essenziale per la riparazione per escissione di nucleotidi (NER), che incide il DNA danneggiato sul lato 3′ delle bolle contenenti la lesione. XPG opera all’interno del complesso di riparazione incentrato su TFIIH e sostiene la stabilità del genoma risolvendo i fotoprodotti da UV e gli addotti voluminosi, limitando così lo stress replicativo e l’accumulo di mutazioni. Oltre alla NER canonica, XPG è stata collegata alla riparazione accoppiata alla trascrizione e al processamento degli R-loop e di altre strutture secondarie del DNA che interagiscono con la segnalazione ATR/CHK1. La disfunzione patogena di ERCC5 è associata a disturbi caratterizzati da risposte al danno del DNA compromesse e da un declino cellulare accelerato, rendendola un nodo chiave per studiare le relazioni genotipo–fenotipo nella biologia della riparazione del DNA.
XPG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERCC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERCC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERCC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERCC5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.