XIAP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416497-ACT

La proteina inibitrice dell’apoptosi legata al cromosoma X (XIAP) è un potente soppressore della morte cellulare programmata che si lega direttamente e inibisce le caspasi effettrici come CASP3 e CASP7, nonché la caspasi iniziatrice CASP9, tramite i suoi domini BIR. Oltre al blocco delle caspasi, XIAP partecipa alla segnalazione dipendente dall’ubiquitina attraverso la sua attività di ligasi E3 RING, intersecando vie associate al recettore del TNF e modulando programmi di sopravvivenza legati a NF-κB. Attraverso queste attività, XIAP contribuisce a determinare la sensibilità cellulare a segnali apoptotici intrinseci ed estrinseci e a plasmare risposte adattative allo stress. Un’espressione o una funzione deregolate di XIAP sono state associate a soglie di apoptosi alterate e a stati di segnalazione infiammatoria rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulla disregolazione immunitaria.

XIAP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di XIAP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

XIAP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus XIAP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione XIAP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di XIAP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus XIAP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da XIAP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via XIAP nelle cellule tumorali con espressione di XIAP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.