xCT Plasmide Double Nickase (m): sc-424104-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- xCT Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il xCT Double Nickase Plasmid (m) e il xCT Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc7a11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
xCT Plasmide Double Nickase (m) | sc-424104-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc7a11 codifica xCT, la subunità a catena leggera dell’antiporto cistina/glutammato del sistema x_c^-, che importa cistina extracellulare in cambio di glutammato intracellulare. Fornendo cistina per la biosintesi del glutatione, xCT sostiene la capacità di tamponamento redox cellulare e limita la perossidazione lipidica, collegando Slc7a11 alle risposte allo stress ossidativo e alla suscettibilità alla ferroptosi. L’attività di xCT si interseca con il trasporto di amminoacidi, i programmi antiossidanti regolati da NRF2 e l’omeostasi del glutammato, influenzando l’adattamento metabolico in condizioni di limitazione di nutrienti. Un’espressione o un’attività di trasporto di Slc7a11 deregolate sono state associate a una tolleranza allo stress alterata in modelli di cancro, in contesti neuroinfiammatori e in altre condizioni in cui lo squilibrio redox e le vie di morte cellulare rappresentano principali endpoint sperimentali.
xCT Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc7a11 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc7a11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc7a11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc7a11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.