XBP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423727-NIC

Xbp1 codifica XBP1, un fattore di trascrizione di tipo basic leucine zipper (bZIP) che agisce come effettore centrale della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response, UPR) a valle dello splicing dell’mRNA mediato da IRE1α. XBP1 attivo guida programmi trascrizionali che aumentano la capacità di ripiegamento del reticolo endoplasmatico, regolano la degradazione associata al RE (ER-associated degradation, ERAD) e rimodellano la biosintesi lipidica per ripristinare la proteostasi durante lo stress secretorio. Nei modelli murini, XBP1 è ampiamente utilizzato per studiare la differenziazione e la funzione delle cellule secretorie professionali, l’adattamento metabolico e il crosstalk della segnalazione infiammatoria nei tessuti soggetti a stress cronico del RE. Un’attività di XBP1 disregolata è stata implicata in modelli di malattia metabolica, neurodegenerazione e patologie immunomediate, attraverso una segnalazione UPR persistente e l’alterazione delle vie delle citochine e della sopravvivenza cellulare.

XBP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Xbp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Xbp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Xbp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Xbp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.