XBP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400131-NIC

XBP1 (X-box binding protein 1) è un fattore di trascrizione della famiglia bZIP (basic leucine zipper) che funge da effettore centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR), in particolare a valle della segnalazione di stress del reticolo endoplasmatico (RE) mediata da IRE1 attraverso uno splicing non convenzionale. L’isoforma di XBP1 sottoposta a splicing attiva programmi trascrizionali che aumentano la capacità del RE, favoriscono il ripiegamento e la secrezione proteica e coordinano la proteostasi con il metabolismo lipidico e la differenziazione cellulare. L’attività di XBP1 è strettamente legata alla funzione delle cellule secernenti nelle linee immunitarie ed endocrine e influenza la segnalazione infiammatoria e l’adattamento metabolico in condizioni di stress. La disregolazione delle vie dipendenti da XBP1 è stata associata a condizioni caratterizzate da stress cronico del RE, tra cui la biologia dei tumori, i meccanismi delle malattie metaboliche e i disturbi immunomediati, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studiare i circuiti di adattamento allo stress.

XBP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XBP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.