Wnt-5b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423719

Panoramica

Il gene murino **Wnt5b** codifica la glicoproteina secreta Wnt-5b, un ligando Wnt non canonico che durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale regola la polarità cellulare, la migrazione direzionale e il rimodellamento del citoscheletro. Wnt-5b segnala preferenzialmente attraverso vie indipendenti da **β-catenina**, come la **polarità cellulare planare** e la segnalazione **Wnt/Ca²⁺**, coinvolgendo recettori tra cui **Frizzled** e co-recettori quali le tirosin-chinasi della famiglia **ROR**, modulando a valle l’attività di **JNK**, **PKC** e delle **piccole GTPasi**. Queste vie influenzano la morfogenesi, il patterning neuronale e la comunicazione stroma–epitelio; inoltre, un’espressione deregolata di **WNT5B** è stata associata ad alterazioni dei programmi di differenziamento e a comportamenti cellulari invasivi in contesti patologici. In quanto nodo di via che interseca la segnalazione infiammatoria e quella della matrice extracellulare, Wnt-5b è spesso studiato in modelli di sviluppo, metabolismo e biologia del microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-5b (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt5b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt5b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt5b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-5b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt5b per lo studio della segnalazione di Wnt-5b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt5b critici per la funzione di Wnt-5b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt5b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt5b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-5b Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-5b (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt5b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt5b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.