Wnt-5a Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423718-LAC

Il gene murino Wnt5a codifica Wnt-5a, una glicoproteina secreta che segnala preferenzialmente attraverso le vie Wnt non canoniche per regolare la strutturazione dei tessuti, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. Wnt-5a interagisce con recettori quali ROR2 e specifici membri della famiglia Frizzled per modulare la polarità cellulare planare e la segnalazione dipendente da Ca2+, con effetti a valle sul rimodellamento del citoscheletro e sull’attività delle piccole GTPasi. In molti contesti antagonizza o rimodella i programmi trascrizionali β-catenina/TCF, coordinando differenziamento e morfogenesi durante lo sviluppo e nell’omeostasi dei tessuti adulti. Una segnalazione Wnt5a deregolata è stata associata a microambienti infiammatori, a una comunicazione stroma–epitelio aberrante e a fenotipi di invasione alterati, rendendola un nodo frequentemente studiato nella biologia del cancro, nella fibrosi e nei modelli di segnalazione immunitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale Wnt-5a (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Wnt5a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Wnt-5a (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Wnt5a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Wnt-5a. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Wnt5a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.