Wnt-3a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423716
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Wnt-3a Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Wnt-3a, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Wnt-3a Antibody (3A6): sc-136163
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Wnt-3a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423716 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Wnt3a codifica la glicoproteina secreta Wnt-3a, un ligando chiave della segnalazione canonica Wnt/β-catenina che regola il patterning embrionale, il mantenimento delle cellule staminali e la morfogenesi tissutale. Il legame di Wnt-3a ai recettori Frizzled/LRP stabilizza la β-catenina, consentendo programmi trascrizionali dipendenti da TCF/LEF che coordinano proliferazione, differenziamento e decisioni di destino cellulare. Oltre ai ruoli nello sviluppo, l’attività di Wnt3a interseca vie che controllano le dinamiche epitelio–mesenchimali, l’organogenesi e le risposte rigenerative. La segnalazione deregolata di Wnt-3a è spesso studiata in contesti di segnalazione aberrante della β-catenina, inclusi trasformazione oncogenica e difetti dello sviluppo, rendendola un nodo centrale per la ricerca su vie e meccanismi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt3a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt3a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt3a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-3a.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt3a per lo studio della segnalazione di Wnt-3a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Wnt3a critici per la funzione di Wnt-3a
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt3a per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt3a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-3a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-3a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt3a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt3a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.