Wnt-2b Plasmide Double Nickase (h): sc-405478-NIC

WNT2B codifica Wnt-2b, un ligando glicoproteico secreto che si lega ai recettori Frizzled/LRP per regolare la segnalazione Wnt durante l’embriogenesi e l’omeostasi dei tessuti adulti. Attraverso effetti sulla trascrizione dipendente da β-catenina e il crosstalk con le vie Wnt non canoniche, Wnt-2b influenza la specificazione del destino cellulare, la proliferazione, la migrazione e i programmi epitelio–mesenchimali. Alterazioni dell’espressione di WNT2B o del contesto di segnalazione sono state associate a una deregolazione dei processi di patterning e rimodellamento dello sviluppo nei compartimenti epiteliali e mesenchimali, e WNT2B è spesso studiato in modelli rilevanti per la malattia in cui l’attività della via Wnt guida le transizioni di stato cellulare. In quanto nodo della via a monte di programmi trascrizionali che controllano differenziamento e architettura tissutale, WNT2B viene comunemente analizzato per mappare le dinamiche di segnalazione indotte dai ligandi e la specificità recettore‑ligando.

Wnt-2b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WNT2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WNT2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WNT2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WNT2B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.