Wnt-2b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423714

Panoramica

Wnt2b codifica per la glicoproteina secreta Wnt-2b, un ligando che attiva i complessi recettoriali Frizzled/LRP per regolare la segnalazione canonica mediata da β-catenina e, in alcuni contesti, le vie Wnt non canoniche. Nei tessuti murini, Wnt-2b contribuisce alla specificazione del destino cellulare, al controllo della proliferazione, alle interazioni epitelio-mesenchimali e alla morfogenesi degli organi, con ruoli di rilievo riportati nello sviluppo oculare e del proencefalo. Modulando i programmi trascrizionali a valle di TCF/LEF, Wnt-2b influenza il mantenimento di cellule staminali/progenitrici e il patterning dei tessuti. Una deregolazione della segnalazione di Wnt2b è rilevante negli studi sui difetti dello sviluppo e sulla patobiologia guidata da Wnt, inclusi meccanismi legati a crescita e differenziazione aberranti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-2b (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt2b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt2b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt2b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-2b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt2b per lo studio della segnalazione di Wnt-2b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt2b critici per la funzione di Wnt-2b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt2b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt2b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-2b Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-2b (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt2b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt2b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.