Wnt-10b Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401465-ACT

WNT10B codifica la glicoproteina secreta Wnt-10b, un ligando modificato da lipidi che attiva i complessi recettoriali Frizzled/LRP per regolare i programmi trascrizionali canonici Wnt/β-catenina e una segnalazione non canonica dipendente dal contesto. Wnt-10b influenza le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione, con ruoli di rilievo nell’osteogenesi e nell’adipogenesi, nonché nel dialogo tra compartimenti epiteliali e stromali durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale. Un’espressione o un output di segnale di WNT10B deregolati possono perturbare le reti di espressione genica dipendenti da β-catenina e modificare il cross-talk della via con processi associati a TCF/LEF, BMP e Notch. Queste alterazioni di pathway vengono spesso studiate in modelli di controllo anomalo della crescita, rimodellamento associato a fibrosi e biologia tumorale, in cui l’attività della via Wnt modula fenotipi simil-staminali e le risposte del microambiente.

Wnt-10b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WNT10B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Wnt-10b Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WNT10B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WNT10B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Wnt-10b. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WNT10B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Wnt-10b nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Wnt-10b nelle cellule tumorali con espressione di WNT10B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.