WDR82 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406963-LAC

WDR82 codifica una proteina contenente ripetizioni WD che funge da adattatore associato alla cromatina, collegando i programmi trascrizionali alla macchina delle modificazioni istoniche. È caratterizzata soprattutto come componente dei complessi COMPASS SETD1A/SETD1B, che sostengono la metilazione di H3K4 e coordinano l’inizio della trascrizione e i processi associati alla RNA polimerasi II. Attraverso queste interazioni, WDR82 contribuisce alla regolazione in prossimità del promotore, al mantenimento dello stato della cromatina e alla fedeltà dell’espressione genica durante la crescita e la differenziazione cellulare. La deregolazione dei fattori associati a COMPASS e delle reti di metilazione di H3K4 è frequentemente implicata in un controllo trascrizionale alterato nel cancro e nelle malattie del neurosviluppo, rendendo WDR82 un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione epigenetica.

Le particelle di attivazione lentivirale WDR82 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di WDR82 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale WDR82 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione WDR82, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di WDR82. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo WDR82 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.