WDR77 Plasmide Double Nickase (h): sc-403890-NIC

WDR77 (nota anche come MEP50) codifica una proteina di impalcatura a ripetizioni WD che funge da cofattore obbligato di PRMT5, supportando la dimetilazione simmetrica dei residui di arginina su istoni e su diverse proteine leganti l’RNA. Attraverso questo complesso metilosoma PRMT5–WDR77, WDR77 influenza l’organizzazione della cromatina, il controllo trascrizionale e lo splicing del pre‑mRNA, con effetti a valle sulla progressione del ciclo cellulare e sui programmi di linea cellulare. WDR77 è stata inoltre collegata alla co-regolazione del recettore degli androgeni e, più in generale, alla segnalazione dei recettori nucleari, connettendola a vie che plasmano gli stati di proliferazione e differenziamento. L’attività deregolata di PRMT5/WDR77 è spesso studiata nella biologia del cancro e in contesti di sviluppo, in cui difetti epigenetici e dell’elaborazione dell’RNA contribuiscono ad alterare le reti di espressione genica.

WDR77 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WDR77 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WDR77. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WDR77. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WDR77 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.