WDR5 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-431247-LAC-2

Il gene murino Wdr5 codifica WDR5, una proteina scaffold conservata a ripetizioni WD40 che costituisce un componente centrale dei complessi metiltransferasici della famiglia SET/MLL per la metilazione di H3K4 dell’istone H3 e coordina fattori di assemblaggio associati alla cromatina per regolare i programmi trascrizionali. WDR5 sostiene il controllo epigenetico dell’espressione genica tramite la regolazione di promotori ed enhancer, influenzando la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea e il patterning dello sviluppo, e si integra con reti più ampie di rimodellamento della cromatina e di processamento dell’RNA. Stati della cromatina dipendenti da WDR5 deregolati sono associati ad alterazioni della differenziazione e a fenotipi proliferativi osservati nel cancro e in altri disturbi guidati da meccanismi epigenetici, rendendo Wdr5 un bersaglio prezioso per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale. L’editing genetico di Wdr5 in modelli murini consente l’analisi funzionale delle vie di metilazione di H3K4, la mappatura delle interazioni proteina–proteina all’interno dei complessi COMPASS/MLL e l’indagine di effetti specifici del contesto sulla biologia delle cellule staminali e sull’omeostasi dei tessuti.

Le particelle di attivazione lentivirale WDR5 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Wdr5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale WDR5 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Wdr5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di WDR5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Wdr5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.