WDR24 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407847

Panoramica

WDR24 codifica una proteina contenente ripetizioni WD che funge da componente centrale del complesso GATOR2, un regolatore chiave del controllo della segnalazione di mTORC1 in risposta al rilevamento degli amminoacidi. Attraverso la modulazione dell’attività di GATOR1, WDR24 contribuisce a coordinare la disponibilità di nutrienti con l’attivazione lisosomiale di mTORC1, con effetti su autofagia, sintesi proteica e programmi di crescita cellulare. Alterazioni di questo asse possono modificare l’omeostasi metabolica e le risposte allo stress, collegando le vie associate a WDR24 a meccanismi frequentemente studiati nel metabolismo tumorale, nelle neuroscienze e in altri contesti in cui è implicata la disregolazione di mTORC1. WDR24 è quindi rilevante per analizzare i circuiti di segnalazione dei nutrienti e i relativi output trascrizionali e traduzionali a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR24 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WDR24 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WDR24 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WDR24 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDR24.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WDR24 per lo studio della segnalazione di WDR24, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WDR24 critici per la funzione di WDR24
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WDR24 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDR24 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDR24 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WDR24. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDR24 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDR24 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WDR24 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WDR24 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.