WDR20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418266-ACT

WDR20 codifica una proteina regolatoria contenente ripetizioni WD che funge da fattore accessorio per complessi enzimatici deubiquitinanti, contribuendo a modulare finemente il controllo, dipendente dall’ubiquitina, della stabilità proteica e della segnalazione. Modulando l’attività di deubiquitinazione, WDR20 può influenzare la proteostasi, la durata dei segnali mediati da recettori e vie chinasi, e i programmi trascrizionali a valle che modellano la crescita cellulare e le risposte allo stress. La deregolazione della segnalazione dell’ubiquitina e della regolazione delle deubiquitinasi è ampiamente collegata alla segnalazione oncogenica, alla neurobiologia e all’omeostasi immunitaria, rendendo WDR20 un nodo utile per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli cellulari umani. Lo studio di WDR20 supporta analisi meccanicistiche della dinamica dell’ubiquitina, dei feedback di via a livello di rete e della regolazione contestuale dell’ampiezza del segnale.

WDR20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WDR20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WDR20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WDR20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WDR20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR20 nelle cellule tumorali con espressione di WDR20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.