Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419607-LAC

Il gene murino *Cdkn1a* codifica l’inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti p21 (Waf1/Cip1), un effettore chiave delle risposte allo stress dipendenti da p53 che frena la progressione del ciclo cellulare guidata da CDK2 e CDK4/6 al checkpoint G1/S. Modulando direttamente l’attività dei complessi ciclina–CDK e i processi di replicazione e riparazione del DNA associati al PCNA (antigene nucleare delle cellule proliferanti), p21 integra i segnali derivanti da danno al DNA, stress ossidativo e attivazione di oncogeni per coordinare l’arresto del ciclo cellulare, la senescenza e un’apoptosi dipendente dal contesto. *Cdkn1a* è quindi centrale nelle vie che regolano la stabilità del genoma e l’omeostasi tissutale, e la sua disregolazione è ampiamente utilizzata come readout molecolare in studi sulla segnalazione dei soppressori tumorali, sul rimodellamento tissutale associato all’infiammazione e sulla senescenza cellulare legata all’invecchiamento nei modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cdkn1a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cdkn1a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Waf1/Cip1/CDKN1A p21. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cdkn1a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.