Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Plasmide Double Nickase (m): sc-419607-NIC

Cdkn1a codifica l’inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti p21 (Waf1/Cip1), un effettore chiave delle risposte al danno al DNA e allo stress che limita l’attività delle CDK per imporre i checkpoint del ciclo cellulare in G1/S e G2/M. p21 è regolata a livello trascrizionale da p53 e integra segnali provenienti da vie dipendenti da ATM/ATR, coordinando l’arresto del ciclo cellulare, la riparazione del DNA e programmi di senescenza dipendenti dal contesto. Attraverso la modulazione dei complessi ciclina–CDK e l’interazione con PCNA, p21 influenza la dinamica della replicazione e la stabilità del genoma. Una deregolazione della segnalazione Cdkn1a/p21 è implicata nella tumorigenesi, nell’invecchiamento dei tessuti e nel rimodellamento associato all’infiammazione, rendendola un nodo comune negli studi sul controllo della proliferazione e sull’adattamento allo stress nei modelli murini.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdkn1a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdkn1a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdkn1a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdkn1a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.