Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Plasmide Double Nickase (h): sc-400013-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h) e il Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDKN1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Antibody (F-5): sc-6246
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1A codifica p21 (Waf1/Cip1), un inibitore delle chinasi ciclina‑dipendenti che integra segnali di stress per limitare la progressione del ciclo cellulare al checkpoint G1/S. Indotta in modo marcato da p53 in risposta al danno al DNA, p21 inibisce i complessi associati a CDK2 e CDK1 e modula la replicazione e la riparazione del DNA dipendenti da PCNA. Attraverso queste interazioni, p21 influenza la senescenza, l’arresto transitorio del ciclo cellulare e le decisioni sul destino cellulare durante lo stress genotossico. Una segnalazione CDKN1A/p21 deregolata è spesso implicata nella trasformazione oncogena e nell’alterazione delle vie dei geni oncosoppressori, ed è rilevante anche per processi come la tolleranza allo stress replicativo e i modelli di senescenza indotta dalla terapia.
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDKN1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDKN1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDKN1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDKN1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.