VRL-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401648-NIC

Il TRPV2 umano codifica il canale VRL-1 (vanilloid receptor-like), un canale ionico TRP non selettivo e permeabile al Ca2+ che integra segnali meccanici, calore e segnalazione lipidica per modulare l’eccitabilità di membrana e le dinamiche del calcio intracellulare. L’attività di VRL-1 influenza vie calcio-dipendenti legate al rimodellamento del citoscheletro, al traffico vescicolare e alla segnalazione a valle associata a MAPK e PI3K, che coordinano migrazione cellulare, differenziamento e risposte allo stress. Il canale è ampiamente studiato in contesti immunitari e neuronali, dove l’ingresso di Ca2+ evocato da stimoli può modulare programmi infiammatori e la trasmissione sensoriale. Alterazioni dell’espressione di TRPV2 o della funzione del canale sono state associate a fenotipi rilevanti per diverse patologie in ambito oncologico, nelle risposte allo stress dei cardiomiociti e nei processi neuroinfiammatori, a supporto del suo impiego come bersaglio meccanicistico nella ricerca focalizzata su specifiche vie di segnalazione.

VRL-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRPV2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRPV2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRPV2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRPV2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.