Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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VPS35 Plasmide Double Nickase (h): sc-402019-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VPS35 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VPS35 Double Nickase Plasmid (h) e il VPS35 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VPS35. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VPS35 Antibody (B-5): sc-374372
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VPS35 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402019-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VPS35 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402019-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS35 codifica un componente centrale del complesso retromer deputato alla selezione del carico, che coordina il recupero dagli endosomi all’apparato di Golgi e il riciclo endosomiale delle proteine transmembrana. Interagendo con le sorting nexins e con il rimodellamento dell’actina dipendente da WASH, VPS35 contribuisce a regolare il traffico dei recettori, l’omeostasi lisosomiale e l’equilibrio tra le vie di riciclo e quelle di degradazione. L’alterazione della funzione di VPS35 perturba la dinamica endolisosomiale e la proteostasi, influenzando la composizione delle proteine di membrana alla superficie cellulare e lungo la via secretoria. Studi genetici e funzionali hanno collegato un’attività alterata di VPS35 a meccanismi neurodegenerativi, in particolare a vie che convergono sul mantenimento delle sinapsi, sul controllo qualità dei mitocondri e sulla suscettibilità all’aggregazione proteica.
VPS35 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VPS35 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VPS35. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VPS35. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VPS35 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.