VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-402019-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- VPS35 CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 VPS35 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 VPS35 Antibody (B-5): sc-374372
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-402019-ACT | 20 µg | $397.00 |
VPS35는 엔도좀에서 트랜스-골지 네트워크(TGN)로의 회수(endosome-to-TGN retrieval)와 다양한 화물 단백질의 엔도좀 재활용을 조절하는 레트로머(retromer) 복합체의 핵심 소단위를 암호화하며, 이를 통해 막 단백질 항상성과 소기관의 무결성을 유지합니다. VPS35는 소팅 넥신(sorting nexin) 및 WASH 복합체와의 상호작용을 통해 엔도좀의 관상화(tubulation), 액틴 역학, 그리고 수용체 신호전달, 리소좀 기능, 자가포식에 영향을 주는 수송 경로를 조율하는 데 기여합니다. VPS35 의존적 소팅이 교란되면 미토콘드리아 품질 관리와 단백질 항상성(proteostasis)이 변화할 수 있으며, 이는 레트로머 기능장애를 결함 있는 엔도리소좀 수송과 연관된 신경퇴행성 질환 및 기타 질환과 연결합니다. 세포내 수송 경로의 중심 노드로서 VPS35는 인간 세포 모델에서 화물 소팅, 시냅스 유지, 스트레스 반응의 기전을 탐구하는 데 널리 활용됩니다.
VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 VPS35 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
VPS35 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 VPS35 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 VPS35 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 VPS35 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 VPS35 위치를 보존하고 내인성 위치에서 VPS35 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 VPS35 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 VPS35 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.