VPS33B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406200

Panoramica

VPS33B codifica una componente centrale del macchinario di tethering di classe C/VPS, che coordina l’ancoraggio delle vescicole e la fusione dipendente dalle SNARE all’interno del sistema endolisosomiale. Agisce insieme a VPS16 e ad altri partner correlati per regolare la maturazione degli endosomi, la biogenesi dei lisosomi e il traffico di membrana polarizzato, influenzando così lo smistamento delle proteine, il riciclo e il flusso degradativo. L’alterazione di VPS33B compromette la polarità epiteliale e l’organizzazione della via secretoria ed è stata associata a disturbi multisistemici del traffico intracellulare, incluso la sindrome ARC, rendendola rilevante per studi sulla dinamica delle membrane e l’omeostasi degli organelli. Nei tessuti immunitari e di barriera, un’attività alterata di VPS33B può influire sulla gestione di granuli/vescicole e sulla composizione delle proteine di membrana, collegandola a questioni più ampie relative a infiammazione e integrità tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VPS33B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VPS33B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VPS33B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPS33B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VPS33B per lo studio della segnalazione di VPS33B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VPS33B critici per la funzione di VPS33B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VPS33B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VPS33B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VPS33B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VPS33B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VPS33B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VPS33B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.