VPS26B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410249

Panoramica

VPS26B codifica una subunità centrale del complesso retromer selettivo per il cargo, che regola il recupero endosoma-Golgi e il riciclo endosomiale delle proteine transmembrana. Coordinando il riconoscimento del cargo con la macchina di smistamento endosomiale, VPS26B contribuisce a mantenere l’omeostasi dei recettori, il traffico vescicolare e l’integrità degli organelli, processi che influenzano l’ampiezza della segnalazione e il turnover delle proteine di membrana. Le vie associate al retromer intersecano l’autofagia, la funzione lisosomiale e il trasporto polarizzato, rendendo VPS26B rilevante per lo studio del mantenimento neuronale e della proteostasi generale. Un traffico endosomiale alterato e la disfunzione del retromer sono stati collegati a fenotipi neurodegenerativi e dello sviluppo, a supporto di indagini meccanicistiche su VPS26B in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS26B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VPS26B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VPS26B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VPS26B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPS26B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VPS26B per lo studio della segnalazione di VPS26B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VPS26B critici per la funzione di VPS26B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VPS26B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VPS26B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VPS26B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VPS26B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VPS26B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VPS26B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VPS26B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VPS26B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.