Von Hippel Lindau/VHL Plasmide Double Nickase (h): sc-400528-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Von Hippel Lindau/VHL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Von Hippel Lindau/VHL Double Nickase Plasmid (h) e il Von Hippel Lindau/VHL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VHL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Von Hippel Lindau/VHL Antibody (VHL40): sc-135657
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Von Hippel Lindau/VHL Plasmide Double Nickase (h) | sc-400528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Von Hippel Lindau/VHL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VHL codifica il soppressore tumorale von Hippel–Lindau, la componente di riconoscimento del substrato di un complesso E3 ubiquitina ligasi di tipo Cullin 2–RING che, in condizioni di normossia, indirizza HIF-α idrossilata verso l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. Collegando il rilevamento dell’ossigeno al controllo trascrizionale di programmi di angiogenesi, metabolismo, eritropoiesi e matrice extracellulare, VHL contribuisce a mantenere l’omeostasi cellulare e risposte appropriate all’ipossia. La perdita o la disfunzione di VHL altera la segnalazione di HIF e riorganizza vie collegate alla biologia vascolare, al metabolismo mitocondriale e alla proteostasi. La perturbazione di VHL è strettamente associata alla malattia ereditaria di VHL ed è frequentemente studiata in modelli di carcinoma a cellule renali per indagare la biologia tumorale guidata dall’ipossia e l’adattamento al microambiente.
Von Hippel Lindau/VHL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VHL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VHL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VHL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VHL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.