VMA21 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407112

Panoramica

VMA21 codifica un chaperone di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) necessario per l’assemblaggio del settore V0 della H+-ATPasi vacuolare (V-ATPasi), un motore centrale dell’acidificazione degli organelli. Consentendo una corretta biogenesi e il traffico della V-ATPasi, VMA21 sostiene il controllo del pH lisosomiale ed endosomiale, il flusso autofagico, il riciclo dei recettori e vie più ampie di proteostasi legate al controllo qualità del RE. L’alterazione di VMA21 compromette i processi dipendenti dall’acidificazione e l’omeostasi cellulare, fornendo un collegamento meccanicistico con le risposte allo stress e con la disfunzione delle vie degradative. Varianti patogene di VMA21 sono state associate a una miopatia legata al cromosoma X con autofagia eccessiva, evidenziandone la rilevanza per il mantenimento delle cellule muscolari e per la regolazione della via lisosoma-autofagia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VMA21 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VMA21 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VMA21 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VMA21 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VMA21.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VMA21 per lo studio della segnalazione di VMA21, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VMA21 critici per la funzione di VMA21
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VMA21 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VMA21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VMA21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VMA21. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VMA21 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VMA21 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VMA21 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VMA21 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.