Vitamin D Receptor/VDR Plasmide Double Nickase (h): sc-400171-NIC

VDR codifica il recettore della vitamina D, un recettore nucleare attivato dal ligando che eterodimerizza con RXR e si lega agli elementi di risposta alla vitamina D per regolare programmi trascrizionali che controllano l’omeostasi di calcio/fosfato, la differenziazione epiteliale e la modulazione immunitaria. In seguito al legame con 1,25-diidrossivitamina D3, VDR coordina lo scambio tra coattivatori e corepressori e si integra con il rimodellamento della cromatina per modulare l’espressione genica lungo vie metaboliche e infiammatorie. La segnalazione di VDR interseca le reti MAPK, NF-κB e Wnt/β-catenina, collegando segnali ambientali e ormonali al controllo del ciclo cellulare e alle risposte allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di VDR sono state associate a disturbi ossei e del metabolismo minerale, fenotipi autoimmuni e biologia tumorale, motivando studi meccanicistici in modelli cellulari umani pertinenti.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VDR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VDR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VDR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VDR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.