Vitamin D Receptor/VDR Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423664-ACT

Il gene murino **Vdr** codifica il recettore della vitamina D (VDR), un recettore nucleare attivato da ligando che eterodimerizza con RXR per legarsi agli elementi di risposta alla vitamina D e regolare programmi trascrizionali che controllano l’omeostasi di calcio e fosfato, la differenziazione epiteliale e la modulazione immunitaria. VDR integra i segnali della segnalazione degli ormoni steroidei con il rimodellamento della cromatina, influenzando il controllo del ciclo cellulare, la funzione di barriera e l’espressione di geni infiammatori in molteplici tessuti. Nella ricerca biomedica, l’alterazione dell’attività di **Vdr** è comunemente studiata in contesti di metabolismo osseo e minerale, fisiologia intestinale e infiammazione immuno-mediata, dove variazioni della trascrizione dipendente da VDR possono rimodellare reti di citochine e vie metaboliche. Queste funzioni rendono **Vdr** un nodo centrale per analizzare la regolazione trascrizionale e il crosstalk tra vie di segnalazione in fenotipi rilevanti per sviluppo e malattia in modelli murini e cellule in coltura.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Vdr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Vitamin D Receptor/VDR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Vdr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Vdr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Vitamin D Receptor/VDR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Vdr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Vitamin D Receptor/VDR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Vitamin D Receptor/VDR nelle cellule tumorali con espressione di Vdr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.