VIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423677

Panoramica

Vip codifica per il peptide intestinale vasoattivo (VIP), un neuropeptide che segnala principalmente attraverso i GPCR VIPR1 e VIPR2 per stimolare l’adenilato ciclasi, aumentare i livelli di cAMP e attivare programmi trascrizionali dipendenti da PKA/CREB. Nel topo, il VIP contribuisce alla comunicazione neuroendocrina, al coordinamento dei ritmi circadiani nel nucleo soprachiasmatico e alla regolazione del tono della muscolatura liscia, della vasodilatazione e dell’attività secretoria nei tessuti periferici. La segnalazione mediata da VIP modula la polarizzazione delle cellule immunitarie e la produzione di citochine, collegando questa via all’omeostasi infiammatoria e alla funzione di barriera delle mucose. Una segnalazione VIP/VIPR deregolata è stata associata ad alterazioni delle risposte neuroinfiammatorie, a fenotipi di motilità e secrezione gastrointestinali e a effetti dipendenti dal contesto sull’immunità associata al tumore e su tratti neuroendocrini in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VIP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vip per lo studio della segnalazione di VIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vip critici per la funzione di VIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VIP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VIP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.