vezatin Plasmide Double Nickase (h): sc-418454-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- vezatin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il vezatin Double Nickase Plasmid (h) e il vezatin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VEZT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: vezatin Antibody (B-1): sc-271347
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
vezatin Plasmide Double Nickase (h) | sc-418454-NIC | 20 µg | $410.00 |
VEZT codifica la vezatina, un componente transmembrana delle giunzioni aderenti che collega il complesso cadherina–catenina al citoscheletro di actina e contribuisce a stabilizzare l’adesione cellula–cellula. La vezatina partecipa alla polarità epiteliale e all’architettura dei tessuti sostenendo il rimodellamento delle giunzioni durante la morfogenesi e influenzando la dinamica del citoscheletro. L’alterazione dell’espressione di VEZT o della sua localizzazione a livello giunzionale può compromettere l’integrità della barriera e i programmi di migrazione cellulare, processi spesso implicati nella displasia epiteliale e nella progressione tumorale. In quanto scaffold associato alle giunzioni, la vezatina è rilevante anche per lo studio della meccanotrasduzione e dell’interazione tra vie di segnalazione alla membrana plasmatica, incluse quelle che rispondono ai cambiamenti nell’adesione cellulare.
vezatin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VEZT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VEZT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VEZT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VEZT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.