versican Plasmide Double Nickase (h): sc-401173-NIC

Il gene umano **VCAN** codifica la versicana, un grande proteoglicano a solfato di condroitina della matrice extracellulare che modella l’architettura pericellulare e regola l’adesione, la migrazione e la proliferazione cellulare attraverso interazioni con ialuronano, integrine e la segnalazione mediata da fattori di crescita. La versicana contribuisce alla morfogenesi dei tessuti e alla riparazione delle ferite e modula la meccanotrasduzione e il traffico delle cellule infiammatorie all’interno dei microambienti stromali e vascolari. Alterazioni dell’espressione di VCAN o dell’equilibrio tra le sue isoforme sono state collegate a programmi di rimodellamento della matrice extracellulare implicati in fibrosi, aterosclerosi e stroma associato ai tumori, dove può influenzare l’invasione e l’infiltrazione immunitaria. Queste caratteristiche rendono VCAN un bersaglio utile per lo studio della segnalazione guidata dalla matrice, delle dinamiche epitelio–mesenchimali e del crosstalk cellula–matrice in sistemi modello umani.

versican Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VCAN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VCAN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VCAN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VCAN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.