Veli1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406559

Panoramica

LIN7A codifica Veli1, una proteina di scaffold contenente un dominio PDZ che aiuta a organizzare domini di membrana polarizzati collegando recettori transmembrana e canali ionici al citoscheletro e ai macchinari di traffico intracellulare. Veli1 partecipa al complesso di polarità Crumbs e ai processi correlati di indirizzamento basolaterale, influenzando la polarità epiteliale, l’integrità delle giunzioni e la localizzazione dei recettori. Attraverso interazioni con proteine MAGUK e altri ligandi PDZ, LIN7A contribuisce all’organizzazione della segnalazione a livello della membrana plasmatica e dei compartimenti sinaptici. Alterazioni della polarità cellulare e complessi di segnalazione mal localizzati sono ampiamente rilevanti per i meccanismi studiati in contesti di neuro-sviluppo e associati al cancro, rendendo LIN7A un bersaglio utile per la dissezione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Veli1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LIN7A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LIN7A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LIN7A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Veli1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LIN7A per lo studio della segnalazione di Veli1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LIN7A critici per la funzione di Veli1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LIN7A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Veli1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Veli1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LIN7A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Veli1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Veli1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LIN7A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LIN7A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.