VEGF-D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401669-ACT

Il gene umano **VEGFD** codifica **VEGF-D**, un fattore di crescita secreto che segnala principalmente attraverso **VEGFR-3** e, in seguito a processamento proteolitico, può anche interagire con **VEGFR-2** per promuovere proliferazione, migrazione e sopravvivenza delle cellule endoteliali linfatiche e vascolari. VEGF-D contribuisce alla **linfangiogenesi**, al **rimodellamento vascolare** e al crosstalk di segnalazione legato alla **matrice extracellulare** con le vie **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e della famiglia **SRC**. La sua espressione è regolata da segnali dello sviluppo e dell’infiammazione ed è spesso studiata nel contesto della differenziazione endoteliale, dell’omeostasi dei fluidi tissutali e del traffico delle cellule immunitarie. Un’attività deregolata di VEGF-D è stata associata a rimodellamento patologico del sistema linfatico e a cambiamenti vascolari/linfatici associati ai tumori, a supporto della sua rilevanza in modelli meccanicistici di biologia del cancro e di malattie infiammatorie.

VEGF-D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VEGFD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VEGF-D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VEGFD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VEGFD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VEGF-D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VEGFD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VEGF-D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VEGF-D nelle cellule tumorali con espressione di VEGFD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.