VEGF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437276

Panoramica

Il fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) è una proteina di segnalazione secreta, legante l’eparina, che promuove l’angiogenesi e aumenta la permeabilità vascolare attivando recettori tirosin-chinasici come VEGFR2 sulle cellule endoteliali. La segnalazione del VEGF si propaga attraverso le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ–PKC per regolare proliferazione, migrazione e sopravvivenza dell’endotelio, nonché risposte di permeabilità legate all’ossido nitrico. Interagisce inoltre con i programmi del fattore inducibile dall’ipossia (HIF) e con il rimodellamento della matrice extracellulare per coordinare la vascolarizzazione dei tessuti durante lo sviluppo e in condizioni di stress. Un’attività del VEGF deregolata è ampiamente utilizzata come indicatore meccanicistico in modelli di neovascolarizzazione patologica, edema associato all’infiammazione, rimodellamento legato all’ischemia e angiogenesi associata ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VEGF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di VEGF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di VEGF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VEGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal VEGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VEGF Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR VEGF (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.