VEGF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423665

Panoramica

Vegfa codifica il fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), una citochina secreta che promuove la proliferazione, la migrazione e la sopravvivenza delle cellule endoteliali durante la vasculogenesi embrionale e l’angiogenesi postnatale. La segnalazione del VEGF coinvolge principalmente VEGFR2 per attivare le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ–PKC e dell’ossido nitrico, coordinando la permeabilità vascolare e le risposte di perfusione tissutale all’ipossia tramite una regolazione dipendente da HIF. Nei modelli murini, alterazioni del dosaggio di Vegfa influenzano il patterning dei vasi, la riparazione delle ferite e il rimodellamento tissutale infiammatorio. La deregolazione della segnalazione VEGF è ampiamente studiata in contesti quali l’angiogenesi associata ai tumori, la neovascolarizzazione retinica e l’adattamento vascolare legato all’ischemia, senza implicare esiti terapeutici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vegfa in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vegfa insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vegfa a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VEGF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vegfa per lo studio della segnalazione di VEGF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vegfa critici per la funzione di VEGF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vegfa per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VEGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VEGF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vegfa. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VEGF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VEGF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vegfa per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vegfa definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.