VEGF-B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401522-ACT

VEGFB codifica il fattore di crescita endoteliale vascolare B (VEGF-B), un fattore di crescita secreto della famiglia VEGF che segnala principalmente attraverso VEGFR1/FLT1 e il co-recettore neuropilin-1. VEGF-B è implicato nella comunicazione endotelio–parenchima, nella regolazione dell’omeostasi vascolare e nella captazione e nel metabolismo dei lipidi nei tessuti ad alta richiesta energetica, intersecando programmi di segnalazione angiogenici e metabolici. Nei modelli cellulari può influenzare le vie di sopravvivenza e le risposte allo stress, e la sua espressione viene spesso valutata insieme alle reti di risposta all’ipossia e di rilevamento dei nutrienti. Un segnale VEGFB deregolato è stato associato in letteratura a fenotipi cardiometabolici e alla patobiologia vascolare, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in sistemi di ricerca rilevanti per la malattia.

VEGF-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VEGFB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VEGF-B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VEGFB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VEGFB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VEGF-B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VEGFB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VEGF-B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VEGF-B nelle cellule tumorali con espressione di VEGFB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.